肽的选取
格利亚蛋白是麸质的两大主要蛋白质成分之一，是乳糜泻患者免疫反应的关键触发因素。该蛋白包含多个表位结合区，可能引发不良免疫反应。为此，我们考虑开发一种能够屏蔽或阻断这些反应位点的肽，作为减轻麸质免疫原性影响的潜在策略[1]。
下一步是鉴定能够结合胶合蛋白序列中免疫原性33聚氨基酸区的肽——这可能阻止识别其富含表位的区域。此前利用噬菌体展示文库（12聚体和7聚体氨基酸）的研究鉴定出了160多个独特的胶蛋白结合肽序列。 其中，p61和p64是最常被分离的肽[2]。这些肽可以独立发挥作用，也可以与分解面筋的酶协同作用。
肽观察频率（第61页和第64页）。观测频率直接反映了它们对胶粘蛋白的结合特异性和亲和力[2]。
细菌的选取
团队探索了从含有八种不同菌株的益生菌混合物Webber Natural Digestion Probiotic 30 Billion中分离菌株。初步接种和镀层形成了密集的细菌草坪，随后连续稀释使得一些可区分的菌落得以实现。在没有菌株特异性选择培养基的情况下区分全部八个菌株过于复杂且耗时，因此该部分项目最终被搁置。然而，这项工作确实为未来选择性试剂和实验设计提供了参考。
表1.使用大肠杆菌Nissle 1917作为益生菌底盘的优缺点[3-8]
表2.将Lactiplantibacillus plantalum作为益生菌底盘的优缺点[10-17]
表3.使用长双歧杆菌亚种长长BL21作为益生菌底盘的优缺点[18-23]
表4.使用Lacticaseibacillus rhamnosus GG作为益生菌底盘的优缺点[24-28]
最终选择
最终，团队决定继续使用大肠杆菌，选择了1917年大肠杆菌Nissle，这是一种长期以来人类安全使用的菌株。 这一选择需要解决具体的技术考量：设计细胞外蛋白的类型特异性分泌标记，选择兼容的启动子序列和选择标记，并准备针对大肠杆菌生理的优化培养基。 尽管评估了其他革兰氏阳性菌株，但1917年大肠杆菌Nissle在安全性、可行性和项目限制之间提供了最佳平衡。
酶的选取
为了实现工程化这种益生菌的目标，我们最初寻找能够靶向面筋或其类似物的酶。我们对乳糜泻酶治疗的综述揭示了几个有前景的口服酶治疗候选药物。 在我们的项目中，我们专注于AN-PEP，一种源自黑曲霉的脯氨酰内肽酶[9]。
参考文献
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